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按标准核定使用防腐剂

防腐剂的糕点定义是为防止食品腐败变质而加入食品中的化学合成或天然物质，具有杀死某些微生物或抑制其生长的中种作用，可延长食品保质期，添加主要用于糕点、剂含究饮料、量测理方乳制品、定及粮食加工品、前处罐头、法优方便食品、化研调味品等的糕点防腐保鲜。按标准核定使用防腐剂，中种对人体健康无害，添加不影响人体消化道菌群，剂含究在消化道内可降解为食物的量测理方正常成分，食品热处理时，定及不产生有害成分。但是一些不法商家存在超量或者违规添加着色剂、防腐剂、甜味剂等现象，最常见的防腐剂是苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸，甜味剂糖精钠在一些小作坊也会有添加，特别是糕点类食品。

近几年，食品安全问题渐渐被老百姓重视，监管部门也加大了监管的力度，食品检测机构把这4类食品添加剂立为常检项目，根据GB2760-2014《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》的规定，糕点以及面包中山梨酸最大使用量为1.0g/kg，脱氢乙酸最大使用量为0.5g/kg，苯甲酸及糖精钠无规定，均为不得检出，目前，对于糕点中这4种防腐剂和甜味剂的高效液相色谱法检测已经得到广泛应用，液相色谱法前处理简单，仪器普及率高，因而研究最详细，应用前景最广，而且针对同时检测这4种防腐剂和甜味剂的方法也有部分标准和相关文献进行研究.

但是，采用液相色谱法，杂质干扰会导致脱氢乙酸色谱峰拖尾现象，由于糕点类样品基质复杂，在进行样品前处理时，如果杂质干扰没有很好的去除干净，将会影响需要分析的目标峰，使目标峰的分离度达不到要求，甚至这些杂质会影响色谱柱以及仪器的使用寿命，所以在进行色谱分析之前，对糕点类样品进行前处理优化显得尤为重要，本研究重在进行样品前处理优化，通过提取溶剂、蛋白沉淀剂、提取时间、净化方式等4个方面进行优化，确定糕点类样品的前处理方案，并进行方法学验证，以得到一个能够高效去除样品中杂质，不影响目标峰分析，实现各目标峰峰型较好、分离度达到要求的样品前处理方法。

一、材料与方法

1、材料与试剂

样品来源：本中心2019年度国抽检验样品，其中的三类糕点：无奶油蛋糕或面包、辣条、月饼，共30个批次。试剂：甲醇(色谱纯)、无水乙醇(色谱纯)、正己烷(色谱纯)均为默克股份两合公司；乙酸铵(优级纯)：厂家为上海麦克林生化有限公司，亚铁氰化钾(分析纯)、乙酸锌(分析纯)、氢氧化钠(分析纯)：厂家均为国药集团有限公司；氨水(分析纯)，广东光华科技股份有限公司；固相萃取小柱QasisPrimeHLB，6CC/200mg，厂家为Waters公司。对照品的来源：苯甲酸，批号：B0003771，含量：99.8％，CAS号：65-85-0，EXP：2021-07-27，厂家：BePurel山梨酸，批号：B00019552741，含量：99.7％，CAS号：110-44-1，EXP：2020-11-08，厂家：BePure；糖精钠，批号：1121904，含量：86.24％，CAS号：128-44-9，EXP：202105-15，厂家：TMstandard；脱氢乙酸，批号：80430100，含量：99.0％，CAS号：520-45-6，EXP：2020-03-17，厂家：ANPEL。

2、仪器与设备

Waterse2695高效液相色谱仪带PDA2998检测器，美国Waters公司lUNIVERSAL320R低温离心机lMilli-QAl0纯水机，Millipore公司；超声清洗仪S300H，Elma公司；涡旋振荡器MS3，IKA公司。

3、方法

（1）对照品储备液的制备

精密称取苯甲酸对照品51.28mg置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为2.0471mg/mL的苯甲酸储备液；称取山梨酸对照品51.88mg置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为2.069mg/mL的山梨酸储备液；称取糖精钠对照品55.10mg置25mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为1.9007mg/mL的糖精钠储备液，糖精钠相对分子质量为205.16，糖精相对分子质量为182.16，两者折算系数为0.8874，故折算为糖精浓度为1.6867mg/mL；称取脱氢乙酸对照品51.71mg置25mL量瓶中，加20g/L氢氧化钠4mL溶解，用水定容至刻度，即得浓度为2.0477mg/mL的脱氢乙酸储备液。

（2）混合标准使用液的制备

精密量取苯甲酸对照品51.28mg置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为2.0471mg/mL的苯甲酸储备液；称取山梨酸对照品51.88mg置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为2.0690mg/mL的山梨酸储备液；称取糖精钠对照品55.10mg置25mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为1.9007mg/mL的糖精钠储备液，糖精钠相对分子质量为205.16，糖精相对分子质量为182.16，两者折算系数为0.8874，故折算为糖精浓度为1.6867mg/mL；称取脱氢乙酸对照品51.71mg置25mL量瓶中，加20g/L氢氧化钠4mL溶解，用水定容至刻度，即得浓度为2.0477mg/mL的脱氢乙酸储备液，对照品储备液5.0mL至100mL容量瓶中，以水定容。

（3）标准线性的制备

分别精密量取苯甲酸对照品51.28mg置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为2.0471mg/mL的苯甲酸储备液；称取山梨酸对照品51.88mg置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为2.0690mg/mL的山梨酸储备液；称取糖精钠对照品55.10mg置25mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为1.9007mg/mL的糖精钠储备液，糖精钠相对分子质量为205.16，糖精相对分子质量为182.16，两者折算系数为0.8874，故折算为糖精浓度为1.6867mg/mL；称取脱氢乙酸对照品51.71mg置25mL量瓶中，加20g/L氢氧化钠4mL溶解，用水定容至刻度，即得浓度为2.0477mg/mL的脱氢乙酸储备液，对照品储备液5.0mL至100mL容量瓶中，以水定容的混合标准使用液0.00mL、0.1mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL，分别至10mL容量瓶中，加水稀释并定容至刻度，摇匀，即得到标准线性，见图3。

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